La paratuberculosis es una enfermedad crónica producida por una bacteria que afecta al aparato digestivo de rumiantes domésticos principalmente. La infección puede presentarse también en otras especies animales y ha sido relacionada en los últimos años con la enfermedad de Crohn en humanos.
Un trabajo de investigación sobre esta patología acaba de ser premiada en la ciudad de León (España) como la mejor tesis en Sanidad animal, la autora del trabajo es Elena Castellanos Rizaldos de la Facultad de Veterinaria de la Universidad de León.
En la tesis se presenta el desarrollo y aplicación de nuevas herramientas de caracterización molecular rápidas aplicadas a Mycobacterium avium paratuberculosis, la bacteria causante de la enfermedad, que permiten la clasificación rápida y subtipificación de aislados, así como su diferenciación de otros miembros del complejo Mycobacterium avium. Empleando estas metodologías se ha identificado por primera vez una variedad de cepas del tipo II de con una mutación natural que afecta a genes directamente relacionados con la virulencia del microorganismo.
El Estudio
La paratuberculosis es una enfermedad crónica granulomatosa que afecta al aparato digestivo de rumiantes domésticos principalmente, aunque la infección puede presentarse además en otras especies. El agente etiológico es Mycobacterium avium subespecie paratuberculosis (M. a. paratuberculosis), miembro del género Mycobacterium.
Las técnicas de electroforesis en campo pulsado (PFGE) y el análisis de los polimorfismos de longitud de los fragmentos de restricción y posterior hibridación con sondas específicas para IS900 (IS900-RFLP) han facilitado la división de las cepas de M. a. paratuberculosis en tres tipos; tipo I (también denominado ovino), II (bovino) y III (intermedio). En ocasiones, la caracterización molecular de algunos aislados y en especial los de crecimiento más lento (tipos I y III) no puede ser realizado mediante estas técnicas debido a los requerimientos de ADN necesarios.
La tesis Caracterización molecular de aislados de M. a. paratuberculosis. Mapa epidemiológico en España presenta el desarrollo y aplicación de nuevas herramientas de caracterización molecular rápidas aplicadas a M. a. paratuberculosis. Entre estas técnicas destaca la PCR y posterior secuenciación de los genes girasa A, girasa B, inh-A y secuencia de inserción IS900 que presentaron polimorfismos de nucleótido único específicos de cada tipo (I, II y III).
Por otro lado, la técnica de hibridación genómica comparada mediante microarray evidenció diferencias genéticas entre los tres tipos y permitió la puesta a punto de técnicas de PCR dirigidas a estas regiones genómicas. Otra técnica desarrollada durante el transcurso de esta tesis fue la de PCR a tiempo real y posterior análisis de las curvas de disociación de alta resolución que permitió la clasificación rápida de los aislados de M. a. paratuberculosis y su diferenciación de otros miembros del complejo Mycobacterium avium (MAC).
La necesidad de trazar los diferentes brotes de paratuberculosis presentes en las diferentes regiones geográficas, hacía imprescindible la puesta a punto de una técnica capaz de sub-tipificar dentro de las cepas de un mismo tipo. Por este motivo, y como complemento a los anteriores trabajos realizamos un análisis de diferentes loci con estructura de unidades repetitivas intergénicas dispersas de micobacterias (MIRU) y secuencias de ADN repetidas en forma de tándem (VNTR). Además, también se aplica esta técnica por primera vez en España para la subtipificación de aislados de Mycobacterium avium subespecies avium obtenidos de aves rapaces en libertad.
Finalmente, la puesta a punto de todas estas metodologías derivó en la identificación y caracterización molecular de una variedad de cepas del tipo II de M. a. paratuberculosis. Estas cepas presentaban una delección de 16 Kb en operones directamente relacionados con la virulencia de este microorganismo y constituían el primer grupo de cepas mutantes naturales para estos genes dentro del complejo MAC.
Fuente: León