Validación de la Técnica de Sedimentación Natural Modificada por Rojas y Torrel en el Diagnóstico de Fasciolosis Crónica en Bovinos, Cajamarca – Perú

1 Juan de Dios Rojas Moncada*; 2 Teófilo Torrel Pajares; 3 Manuel Raico Gallardo

1,2 Docentes de la Facultad de Ciencias Veterinarias. Universidad Nacional de Cajamarca. Perú. Av. Atahualpa 1050  Email: juanrm60@hotmail.com

3 Médico Veterinario. Práctica Privada.

Resumen

Debido al desconocimiento de la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo de la técnica de sedimentación natural modificada por Rojas y Torrel en el diagnóstico de fasciolosis bovina crónica, se realizó la presente  investigación con el objetivo de validar esta  técnica.  La investigación tuvo lugar en el camal del distrito Baños del Inca y en el Laboratorio de Parasitología Veterinaria de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Cajamarca, entre octubre y diciembre del 2012. Cajamarca está ubicado a una altitud de 2630 msnm, latitud sur 7º10’, longitud oeste 78º30’, sierra norte del Perú. Se utilizó una muestra de 323 bovinos (p=0.7), de diferente edad y sexo, libres de paranfistomidos.  De cada animal, previo al sacrificio se extrajo muestra de heces directamente del recto en aproximadamente 100 gramos y luego del sacrificio se extrajo el hígado para examinarlo y confirmar la presencia o ausencia del trematodo Fasciola hepatica; considerando a la necropsia, como “prueba de oro”.  En la técnica se utilizó vaso de 400 mL con bordes perpendiculares a la base para homogenización de la muestra, vaso de forma cónica de 260 mL para sedimentación, agitador eléctrico (batidora de mano), embudo de 2 pulgadas de diámetro con tamiz de 80 hilos por pulgada y orificios de 213 micras, placa petri de 10 cm de diámetro (con columnas paralelas a 10mm entre ellas), agua de caño, 1 g heces, 5 minutos para la sedimentación, una sola decantación dejando aproximadamente 15 mL de sedimento,  teñido de huevos con lugol parasitológico fuerte, observación en estereoscopio a 16x, estilete punta fina para separación de fibras vegetales en el sedimento.  Los datos se analizaron mediante las fórmulas de sensibilidad (VP/VP+FN) x100; especificidad (VN/ VN+FP) x100; valor predictivo positivo (VP/VP+FP) x100 y valor predictivo negativo (PV/ VN +FN) x100; para lo cual se empleó una tabla de contingencia 2×2.  En los resultados se determinó una  sensibilidad de 93%, especificidad 91%, valor predictivo positivo 96% y valor predictivo negativo 86%.  Se concluye que la técnica de sedimentación natural modificada por Rojas y Torrel es una técnica eficiente en el diagnóstico de fasciolosis bovina crónica causada por Fasciola hepatica por su alta sensibilidad y especificidad.

Palabras clave: especificidad,  fasciolosis, sedimentación, sensibilidad.

Abstract

Due to lack of sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of modified natural sedimentation technique by Rojas and Torrel in the diagnosis of chronic bovine fasciolosis, this research was conducted in order to validate this technique. The research took place in the slaughterhouse district Inca Baños and in the Laboratory of Veterinary Parasitology, Faculty of Veterinary Science, National University of Cajamarca, between October and December 2012. Cajamarca is located at an altitude of 2630 masl, latitude 7 º 10 ‘west longitude 78 ° 30’ northern highlands of Peru. We used a sample of 323 cattle (p = 0.7) of different age and sex, paranfistomidos free. From each animal prior to slaughter stool sample was extracted directly from the rectum at approximately 100 grams and then sacrifice the liver was extracted to examine and confirm the presence or absence of the trematode Fasciola hepatica, considering at necropsy, as the «gold «. Technique was used in the 400 mL beaker with edges perpendicular to the base for sample homogenization, glass of 260 mL conical sedimentation, electric mixer (hand mixer), funnel 2 inches in diameter with 80 threads sieve holes per inch and 213 microns, petri dish 10 cm in diameter (with a 10mm parallel columns between them), tap water, 1 g faeces, 5 minutes for sedimentation, decanting one leaving approximately 15 mL of sediment, dyeing parasitological lugol eggs with strong stereoscopic observation at 16x, fine tip stylus for separation of plant fibers in the sediment. The data were analyzed using the formulas of sensitivity (TP / TP + FN) × 100, specificity (TN / TN + FP) × 100, positive predictive value (TP / TP + FP) x100 and negative predictive value (PV / VN + FN) x100, for which we used a 2×2 contingency table. In the results we determined a sensitivity of 93%, specificity 91%, positive predictive value 96% and negative predictive value 86%. We conclude that the modified natural sedimentation technique by Rojas and Torrel is an efficient technique in the diagnosis of chronic bovine fasciolosis caused by Fasciola hepatica by its high sensitivity and specificity.

Keywords: specificity, fasciolosis, sedimentation, sensitivity.

Introducción

La fasciolosis es una enfermedad parasitaria que se caracteriza por la inflamación del hígado y de los conductos biliares, con frecuencia de carácter crónico y acompañada de trastornos nutritivos; cuyo agente causal es Fasciola hepatica, que afecta a numerosos mamíferos, tanto domésticos como silvestres y aun al hombre (Cordero y col., 1999). Es considerada como un parásito que causa una de las enfermedades parasitarias más importantes de los rumiantes domésticos, estimándose que un cuarto de la población total de bovinos y ovinos del mundo pastorean en áreas donde F. hepatica está presente y el medio ambiente es favorable para su mantenimiento y dispersión (Nari y Fiel,  2001).

Estudios realizados en Perú, demuestran alta prevalencia de fasciolosis bovina.  En Cajamarca 80.8 % (Rojas, 2009) y en  Arequipa 68.2% (Ayaqui y Miranda, 2002); con pérdidas económicas anuales de 11 millones de dólares (Rojas, 1990); 18,5 millones de dólares (Manrique y Cuadros, 2002), 50 millones de dólares por decomiso de órganos en el camal, baja ganancia de peso y menor fertilidad y costos asociados al tratamiento (Espinoza  y col., 2010).  En Cajamarca, 230 mil dólares por decomisos de hígados en camales de la Región;  correspondiendo el  77% para  bovinos (Rojas,  2009).

El diagnóstico de la fasciolosis puede realizarse mediante la observación de la sintomatología, la utilización de técnicas específicas (biopatológicas, parasitológicas e inmunológicas) y los hallazgos de necropsia (Cordero y col.,  1999).  El diagnóstico se confirma por el hallazgo de huevos en las heces, éstos miden 130-150 por 63-90 micras (Soulsby, 1987).  Los métodos de sedimentación son los que más se utilizan por su sencillez.  En bovinos la efectividad de esta prueba es del orden del 70% en un solo examen, con una serie de tres, aumenta a 93% (Quiroz, 2011).

Sin embargo,  Cajamarca siendo una zona endémica a la fasciolosis no se contaba con una técnica de sedimentación validada para realizar diagnóstico para esta parasitosis, por tal razón se realizó la validación de la técnica modificada por Rojas y Torrel mediante coproscopía y necropsia como “prueba de oro”; obteniéndose la sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo.

Foto. Hígado de bovino con presencia de fasciolas

Materiales y Métodos

La investigación tuvo lugar en  el camal del distrito Baños del Inca y en el Laboratorio de Parasitología Veterinaria de la Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Cajamarca, entre octubre y diciembre del 2012.  Cajamarca está ubicado a una altitud 2630msnm, latitud sur 7º10’, longitud oeste 78º30’, sierra norte del Perú. Se utilizó una muestra de 323 bovinos considerando (p=0.7), de diferente edad y sexo, libres de paranfistomidos.  Cada animal fue identificado con un código correlativo, de cada uno de ellos previo al sacrificio se extrajo muestra de heces directamente del recto en aproximadamente 100 gramos y luego del sacrificio se extrajo el hígado y vesícula biliar para examinarlo y confirmar la presencia o ausencia del trematodo Fasciola hepatica; considerando a la necropsia, como “prueba de oro”.  En la técnica se utilizó vaso de 400 mL con bordes perpendiculares a la base para homogenización de la muestra, vaso de forma cónica de 260 mL para sedimentación, agitador eléctrico, embudo de 2 pulgadas de diámetro con tamiz de 80 hilos por pulgada y orificios de 213 micras, placa petri de 10 cm de diámetro (con columnas paralelas a 10mm entre ellas), agua de caño, 1 g heces, 5 minutos para la sedimentación, una sola decantación dejando aproximadamente 15 mL de sedimento,  teñido de huevos con lugol parasitológico fuerte, observación en estereoscopio a 16x. Los datos se analizaron mediante las fórmulas de sensibilidad (VP/VP+FN) x100; especificidad (VN/ VN+FP) x100; valor predictivo positivo (VP/VP+FP) x100 y valor predictivo negativo (PV/ VN +FN) x100; para lo cual se empleó una tabla de contingencia 2×2.

Foto. Kit de la técnica

Resultados y Discusión

Tabla 1. Validación de la técnica de sedimentación modificada por Rojas y Torrel en el  diagnóstico de fasciolosis bovina crónica.

Tabla 2. Relación entre el resultado de la técnica de sedimentación modificado por Rojas y Torrel  y la presencia o ausencia de Fasciola hepatica en conductos biliares y vesícula biliar en bovinos observados a la necropsia.

Los resultados obtenidos  de la técnica de sedimentación natural modificada por Rojas y Torrel validada mediante necropsia como “prueba de oro” demuestran una sensibilidad de 93%, especificidad 91%, valor predictivo positivo 96% y un valor predictivo negativo de 86 %; dado a que de los 323 bovinos evaluados en la técnica de sedimentación, resultaron 207 verdaderos positivos, 09 falsos positivos, 92 verdaderos negativos y 15 falsos negativos (Tabla 1 y 2).

En relación a la sensibilidad consideramos una prueba eficiente debido a que es capaz de detectar el 93% de probabilidad de verdaderos positivos a la presencia del trematodo adulto en conductos biliares, siendo  muy superior a lo reportado por Quiroz (2011) quien indica que la prueba de sedimentación en bovinos realizada en una sola vez, utilizando 5g de heces alcanza una efectividad de 70% y por tres veces consecutivas llega a 93%. Esta diferencia, podrían deberse a que en el protocolo de nuestra técnica las heces son homogenizadas con un agitador eléctrico (batidora de mano) que al parecer los huevos son separados de las fibras vegetales con mayor eficiencia, a la utilización de una malla metálica de 80 hilos/pulgada, a la decantación por una sola vez y la lectura que se ejecuta con la ayuda de un estilete (aguja Nº 22 x ½ pulgada) para separar las fibras vegetales, además de una placa rayada paralelamente a 10 mm de distancia entre ellas que abarca el área del campo de observación del estereoscopio a 16x, es decir, no existe un área sin observar en toda la placa.

En cuanto a la  especificidad, también consideramos eficiente, dado a que esta prueba es capaz de diagnosticar el 91 % de probabilidad como verdaderos negativos a la presencia de la Fasciola hepatica en conductos biliares de bovinos, esto se debe a que se detectó nueve (09) falsos positivos, lo cual habría que considerar al realizar un diagnóstico de la fasciolosis crónica en bovinos. Sin embargo, es motivo de investigarlo.

En relación a los falsos negativos, es probable que las fasciolas hayan estado en periodo prepatente, en tal sentido habría concordancia con lo manifestado por Quiroz (2011), quien menciona que la forma directa para la identificación y cuantificación de huevos de Fasciola hepatica, no es posible hasta después de tres meses de la infestación, es decir, estén en periodo patente; como también debe considerarse que hay una variación entre las diferentes horas del día entre 5 y 10% pueden ser falsos negativos. Así mismo, podría estar  relacionado a la eliminación intermitente de huevos de las fasciolas adultas, tal como precisa Borchert (1981).

En lo que respecta a los nueve (09) falsos positivos, podría deberse a que los bovinos hayan ingerido el agua con huevos de Fasciola y éstos habrían sido eliminados con las heces, hecho que concordaría con Botero (2003), quien menciona que existen diagnósticos falsos positivos cuando se encuentran huevos al examen coprológico, en pacientes que han ingerido hígado crudo o mal cocido, con parásitos; en estos casos el hombre no sufre la infección sino que elimina los huevos ingeridos.  Al respecto, en bovinos, es motivo de investigarlo.

Finalmente el valor predictivo positivo de la técnica de sedimentación natural evaluada en el diagnóstico de la fasciolosis en bovinos, es una cifra bastante confiable, dado a que un individuo con resultado positivo a la prueba tiene el 96% de probabilidad de estar realmente enfermo; en tanto que el valor predictivo negativo  de la técnica de sedimentación evaluada en el diagnóstico de la fasciolosis, podríamos considerarla aceptable, debido a que un individuo con resultado negativo a la prueba tiene el 86% de probabilidad de estar realmente sano.  Al respecto, no es posible discutir debido a que se carece de información.

Foto. Hígado con más de 300 fasciolas adultas

Conclusiones

Se concluye que la técnica de sedimentación natural modificada por Rojas y Torrel es una técnica eficiente en el diagnóstico de fasciolosis bovina crónica causada por Fasciola hepatica por su alta sensibilidad y especificidad.

Referencias Bibliográficas

• Ayaqui, R. y E. Miranda.  2002. Fasciolosis en la localidad de Uchumayo -Arequipa. Libro de resúmenes del V Congreso Peruano de Parasitología. Trujillo.
• Borchert, A., 1981. Parasitología Veterinaria, 3ª Edición. Editorial Acribia S.A.  Zaragoza-España. p47.
• Botero, D., Restrepo, M., 2003. Parasitosis humana. 4a Edición. Editorial CIB. Medellín-Colombia. p328.
• Cordero, M., Rojo, F., Martínez, A., Sánchez, M., Hernández, S., Navarrete, I., Diez, P., Quiroz, H., Carvalho, M., 1999.  Parasitología Veterinaria, 1a Edición,  Editorial   Mcgraw-Hill-Inteamericana. Madrid, España. p 260-271.
• Espinoza, J., Terashima, A., Herrera, P., Marcos, L. 2010. Fasciolosis humana y animal en el Perú: impacto en la economía de las zonas endémicas. Rev Peru Med Exp Salud Pública 27(4): 604-612.
• Manrique, J. y S. Cuadros.  2002.  Fasciolosis: Buscando estrategias de control. 1ª edición, Edit. Akuarella Editores,  Laboratorio Veterinario del Sur, Universidad Católica de Santa María, Arequipa-Perú.
• Nari, A. y C. Fiel. 2001. Enfermedades Parasitarias de importancia económica en Bovinos:  Bases epidemiológicas para su prevención y control.  Edit. Hemisferio Sur, Montevideo – Uruguay. p 233.
• Rojas, J.  2009. Impacto económico por decomiso de hígados infectados con  Fasciola hepatica en camales de la Región  Cajamarca, 2008. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de Cajamarca, Perú.
• Rojas, M.  1990. Parasitismo de los rumiantes domésticos: Terapia, prevención y modelos para su aprendizaje. 1ª edición, Edit. Maijosa, Lima-Perú. p 112.
• Quiroz, H., 2011. Parasitología y Enfermedades Parasitarias de los Animales Domésticos. 4ª Edición. Editorial Limusa. México. p232-244.
• Soulsby, E., 1987. Parasitología y Enfermedades Parasitarias en los Animales Domésticos, 1ª Edición. Editorial Interamericana. México.p4-44.